Işık nedir?
Işık elektromanyetik bir radyasyondur.
Basit bir nanometre scalası:
___0,1nm____1nm________180nm___380nm______780nm____________400x103______
gamma X-ray UV Visible IR Microwave
(Ultra Viole) (Görünür ışık)
Biyokimya Cihazlarının Ölçümlerindeki Temel Prensipler Ve Ölçüm Methodları:
Kompetatif Bağlanma Reaksiyonu:Bu reaksiyonlarda ortama antijen,antikor ve işaretli antijen konur.Ortamda bulunan sınırlı sayıda antikor bağlanma kısmı için sabit miktarada işaretli antijen yarışacağı için antijenin tamamı sınırlı sayıda antikor bağlanma yerine bağlanamaz.
Fakat bu reaksiyonda bazı olayları önceden kabul etmek gerekmektedir:
1)Antijen ve antikor homojendir.Onların geri dönüşüm etkileşimleri belli bir dengededir.
2)Antijen üzerindeki işaret hiçbir şekilde antijen ve antikor reaksiyonu ile etkileşim halinde olmaz
3)Antikor ve antijen sadece birebir eşleşir,bir moleküler komplex şeklinde olurlar.
4)Antijen antikor komplex’i tamamiyle serbest antijenden ayrılabilir.
RIA(Radio Immuno Assay):Vücut sıvılarındaki antijen ve antikorların belirlenmesinde radyoizotopların kullanıldığı immunolojik bir tekniktir.RIA methodu kompetitif bağlanma reaksiyonu şeklindedir.Yani sabit miktarda ve radyoizotop işaretli numunedeki antijen,sınırlı sayıda antikor bağlanma yerine bağlanabilmek için yarışırlar.
Kullanılan Reaktifler:RIA’da kullanılan antikor reaktifler’iplastik tüp,polistiren veya bilya gibi katı bir faza bağlanmıştır.Radyoizotop işaretli antijen moleküle kovalent olarak radyoizotop bağlanması ile elde edilir.Radyoizotop olarak ençok Iyot 125(I125)kullanılır. Emniyet açısından tüp başına 0,5 mikroküri konulabilir.
Kullanılan Ayırma Teknikleri:
1)Solid-faz Bağlanması:En sık kullanılan,en basit ayırma tekniğidir.Bu teknikte bağlanma
sonunda serbest kalan radyoizotop işaretli antijen ayrılır yada polimer kaplı demiroksit partiküllerine bağlanır.
2)Oratama aktif karbon konur.
3)Çöktürme tekniği kullanılır.
Kemiluminisans:Reaksiyon ürünlerinden bir tanesinin ışık olduğu kimyasal reaksiyondur.Örnek olarak “luminol” isimli kimyasal maddeye “peroksidaz”isimli başka bir madde etki ederse ürünlerinden bir kısmı ışık olmak üzere bir reaksiyon oluşur.
Kemiluminisans’ın avantajı çok hassas olamsıdır.Reaksiyon çok hassas PMT(photon multiplayer tube)’ler tarafından ölçülür.
Bir molekül peroksidaz dakikada birçok milyondan fazla substuratı çevirir.Bu sebeple kemiluminisans,RIA’dan daha çok tercih edilmektedir.
Sistemin dezavantajı ise bu reaksiyonların sadece heterojen bir ortamda yapılabilme zorunluluğudur.
Bioluminesans:Kendiliğinden (tabii)olarak meydana gelen bir kemiluminisans olayıdır.
Immunoassay: Immunoassay’ler ,antikorların spesifik bağlanma ajanları olarak kullanıldığı reaksiyonlardır.Bu testlerin prensibi antijen ve onun ilgili antikoru arasında spesifik,geri dönüşümsüz bir bağlanma olmasıdır.Bu bağlanma bir komplex şeklindedir.
|